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听觉的研究方法
日期:2016/5/2       浏览次数:533

 听觉器官-耳主要位于颅底的颞骨之中,相关的结构及其毗邻关系十分复杂,而且各结构非常微小,因此,为了研究耳的形态结构,研究者常借助可以放大数倍的解剖显微镜或手术显微镜,在镜下使用显微解剖器械(如解剖刀、镊、剪刀等)对标本进行解剖,特别是中耳和内耳的重要结构藏在颞骨内,所以研究者必须用高速磨钻细心打开颞骨,才能暴露其中的结构。通过这样的解剖研究,可以了解各器官的形态结构特征,以及各结构之间的空间毗邻关系,这些知识对一位耳科医生来说是非常重要的,熟练掌握听觉器官的相关解剖知识是做好耳科医生的前提之一。临床医师也常用显微解剖和显微手术方法研究人体头颈部的神经、血管、颅骨和各组织器官的结构关系,在此基础上提出手术入路和切除病灶的方法。

现代的影像技术已经非常先进,借助计算机断层扫描(computed tomography,CT)或磁共振成像(magnetic resonance imaging,MRI)来研究颞骨以及耳的解剖也是一个有效方法。CT在显示骨性结构方面见长,而MRI长于显示软组织。使用这些影像技术对标本或活体扫描后,可以获得连续的断面图像,研究者再对这些图像进行分析、测量等工作。但是目前临床上用于诊断目的的影像技术在显示微细结构(如毫米级以下的结构)的能力还很有限。现在有一种只用于研究目的的显微CTMicroCT)可以扫描小标本快或小动物,它可以清楚地显示毫米级以下甚至数微米级的结构,这是研究者的一个好帮手。

切片才能达到这个目的,这是医学研究的基本技术之一。通常用的光学显微镜可放大1500倍左右,分辨率为0.2μm。而组织切片的制作工艺比较复杂,例如常用的石蜡包埋切片的方法是,先取出要研究的小组织快,用甲醛等溶液进行固定处理,再用乙醇脱水、二甲苯透明,之后用石蜡包埋组织块,使用切片机将组织块切成数微米的薄片,将这些切片贴在玻璃片(即载玻片)上,在用二甲苯脱蜡之后,对切片进行染色,常用的染色方法是苏木精和伊红染色,简称HE染色。苏木精为碱性染料,能将细胞核染成蓝色;伊红为酸性染料,常将细胞质染成淡红色。染色后进行封片就可以用显微镜观察组织细胞的结构了。

电子显微镜(简称电镜)的发明和使用,使人类探索生命奥秘的步伐大大加快了。电子显微镜的分辨率为0.2nm[注意:1mm(毫米)=1000μm(微米)1μm=1000nm(纳米)],比光镜高1000倍,可放大几万倍到几十万倍,通过它,人们可以观察到细胞内更微细的结构,这些在电镜下所见的结构称为超微结构(ultrastructure)。电镜又分为透射电镜和扫描电镜。

透射电镜(transmission electron microscope,TEM)是由电子发射器发射的电子束穿透样品,经过磁场的聚合放大后,在荧光屏上显像。一般要对样品的超薄切片(切片厚5080nm)进行电子染色,如用重金属盐铅、铀等进行电子染色,以增加物像的反差而提高结构的清晰度。扫描电镜scanning electron microscope,SEM)是研究细胞或器官表面立体微细结构的电子仪器。由电子发射器发射一束细电子束,在样品表面一点一点移动,扫描整个样品表面,产生代表样品形貌的电子信号,经过放大在荧光屏上成像,图像清晰而富有立体感。

其它还有诸如荧光显微镜、倒置相差显微镜、激光共聚焦显微镜等仪器用于研究组织细胞的微细结构及其功能活动。

组织化学和细胞化学技术:组织和细胞由各种化学成分组成,不同的组织和细胞会有不同的化学组成。组织化学和细胞化学技术就是应用化学反应和物理反应原理检测组织和细胞内某种化学成分并进行定位定量及相关功能研究的一种实验技术。如糖类、脂类、酶、核酸等可与试剂发生化学、物理反应,形成有色的终末产物,然后可以在显微镜下观察分析。

组织与细胞培养技术(tissue and cell culture):是将离体的细胞、组织甚至器官,放置在合适的培养液中,在无菌和适当的温度下进行培养,使之生存和生长的一种技术。组织培养可用于研究各种理化因子(温度、药物、毒物等)对活细胞的直接影响,并能随时在显微镜下观察、摄影记录。还可以与其它技术方法结合,研究某种因素对细胞增殖、分化、代谢、运动、吞噬、分泌等的影响,也可以研究细胞癌变和逆转等机制,达到在体实验难以达到的研究目的。

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